用Saran包装膜或Paraflm膜围绕凝胶四周但不要覆盖凝胶

作者:6up  来源:6up扑克  时间:2020-04-28 02:38  点击:

  13.用Saran包装膜或Paraflm膜围绕凝胶四周,但不要覆盖凝胶。以此作为屏障可以阻止液体从皿中直接流至凝胶上方的纸巾层中。如果纸巾堆放的并非十分整齐,就容易从凝胶边缘垂下并与下层的吸水纸接触。这种问题造成的短路是DNA从凝胶向膜转移效率低下的主要原因。

  14.用适当的转移缓冲液将凝胶表层湿润。将湿润的膜放置于凝胶上,并使两者切角相重叠。为避免产生气泡,应当先使膜的一角 与凝胶接触,再缓慢地将膜放到凝胶上。膜的一条边缘应恰好超过凝胶上部加样孔线的边缘。

  15.用适当的转移缓冲液湿润两张厚的吸水纸,并放置于湿润的膜上。用吸管在膜表面滚动,赶走气泡。

  16.切或折叠一堆略小于吸水纸的纸巾(5~8 cm高)。将纸巾放在吸水纸上。在纸巾顶部放置一块玻璃板,然后用一个400g重物压实。其目的是为了建立液体从皿中经凝胶向膜流动的液流,以洗脱凝胶中的变性DNA并使其聚集在膜上凝胶顶部的重物其重量应当能够保证印迹实验各种不同器物之间的良好接触,但是又不会挤压凝胶。

  挤压可以挤出凝胶内部的液体,剩下的脱水物质会很大程度地阻碍DNA的运动,并且极大地降低从凝胶向膜的转移效率。未切割或折叠的整块纸巾也可以用于以上实验,但前提是Saran包装膜或Parnfilm 膜形成的保护层可以有效地防止缓冲液的渗漏。

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