用一层Saran包装膜将膜覆盖将膜暴露于磷光屏

作者:6up  来源:6up扑克  时间:2020-04-12 02:44  点击:

  9.将膜放在一叠纸巾上以去除大部分液体。将潮湿的膜放在一张 Saran包装膜上。在Saran包装膜上取几个不对称的位置贴上黏性点状磷光标签。这些标记物可以与膜一起进行放射自显影。也可以将膜在空气中干燥后,用水溶性胶水将其黏在一-张3MM滤纸上.

  10.用一层Saran包装膜将膜覆盖,将膜暴露于磷光屏。通常曝光1~4h 已经足够检测哺乳类动物基因组中的单拷贝基因序列。

  如果膜上的DNA还要用另一种探针进行杂交,请见本方案后的附加方案:将探针从膜上洗脱。许多因素都会造成Souhern杂交中多余的背景。表2-9列出了最常见的问题和降低背景的预防措施。

  当被检测的基因与某一探针的序列仅仅是相关而不是完全一致时, 可以在降低严谨性的条件下进行杂交。杂交成功与否关键在于:①杂交探针与靶序列的一致性; ②正确选择杂交条件。来自于单一物种的基因家族成员,或不同物种的同工基因,只要其序列-致性达到≥65%,就可以通过低严谨性杂交将其分离出来。

  鉴别序列一致性 65%的基因则需要操作技巧及运气。后者更容易通过低严谨性PCR (请见第8章)分离出来。下文给出的杂交/洗膜条件适用于鉴别序列一-致性≥65%的基因。

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